如何识别并避免免疫分析中的干扰？( 二 ) 免疫分析法是使用抗体检测不

交叉反应也可以在蛋白印迹检测或免疫组化实验中发挥重要作用。尽管人们不知道在每种情况下，这些不必要的结合的确切分子机制，交叉反应在其他条带或细胞结构的染色中变得很明显。在蛋白印迹检测中，人们假设在许多情况下降解正确蛋白质的产物是自然的或合理的方式造成的。但在某些情况下，这并不是事实，我们需要考虑一抗或二抗的交叉反应。

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图1:在免疫分析中可能出现的不同干扰效应的示意图。
A:标记的检测抗体与未封闭的表面的非特异性结合。结果是假阳性信号。
B:标记的检测抗体与封闭表面的非特异性结合。尽管表面被封闭，但抗体与封闭蛋白相结合。结果是假阳性信号。
C:干扰蛋白与检测抗体的Fc片段结合，并在空间上阻碍待测物的结合。结果是假阴性信号。
D:捕获抗体与检测抗体的Fc片段结合。结果是假阳性信号。待检测物不能再与捕获抗体结合。
E:不受影响的试验，没有任何干扰。理想的状态。
F:通过异嗜性抗体或HAMAs进行的桥接结合。通过此方法，捕获抗体与检测抗体连接，从而产生假阳性信号。
G:一种与捕获抗体具有抗独特型结合特性的HAMA 。干扰抗体结合在捕获抗体Fab片段的高度可变区域，从而阻止了待测物的结合。因此，就会出现假阴性信号。
H：一种与检测抗体具有抗独特型结合特性的HAMA 。干扰抗体结合在检测抗体Fab片段的高度可变区域，并阻止待测物的结合。结果，出现了假阴性信号。
I：干扰物质与捕获抗体的交叉反应性。结果是假阴性信号。
J：干扰物质与检测抗体的交叉反应性。结果是假阴性信号。
K：与捕获抗体和与检测抗体的交叉反应性。这种现象在实践中很少出现，这种抗体的特异性肯定较低。这种干扰现象也可以发生在待测物具有蛋白质保守氨基酸序列，该序列也出现在其他蛋白质上。
L：样本中的其他蛋白质掩蔽待测物，使其表位被封闭，无法与捕获抗体结合，或空间位阻情况严重。结果是假阴性信号。
非特异性结合带来的干扰
与交叉反应密切相关的是非特异性结合。然而，两者在分子水平上的机理有所不同。在日常的实验室工作中，这些差异不明显。交叉反应中，造成交叉反应的物质是已知的，并且它的交叉反应性可以定量，譬如与交叉反应物的浓度竞争关系。而在非特异性结合的情况下，结合涉及的物质，远远超过目标分析物(如与白蛋白或免疫球蛋白的非特异性结合)或与表面(如ELISA孔或免疫印迹膜表面)或蛋白质芯片中的固定抗体斑点。
基质效应
基质效应是样本中所含成分带来的干扰效应的总和，影响目标分析物的检测。如果产生干扰的真正分子原因还没有确定，但人们知道它来自于样本，那么一般就称之为“基质效应” 。从一种效应到另一种效应的边界是不固定的，有时并不清晰。一些基质效应来自“抗动物抗体” ，另一些来自异嗜性抗体，或来自内源性干扰，或仅仅来自粘度、ph值或仅仅来自盐浓度。
抗动物抗体产生的干扰
人抗动物抗体(HAAA)可为IgG-、IgA、IgM或IgE型。它们是免疫系统应答的一部分，与动物来源的免疫球蛋白结合。 HAAAs在许多诊断性免疫分析中是众所周知的干扰物，有时可能是80%的临床标本的一部分——取决于具体应用研究。 HAAAs的浓度最高可达每毫升数毫克。