|活细胞转录组测序技术 只需微创提取,即可看清细胞“前世今生”
【|活细胞转录组测序技术 只需微创提取,即可看清细胞“前世今生”】活细胞转录组测序技术的核心是通过对活细胞中的部分细胞质进行微创提取 , 并对极其微量的细胞质RNA进行扩增 , 实现在进行单细胞转录组测序后 , 依旧保持细胞的存活和功能 , 从而可以跟踪细胞的动态变化 。
◎刁雯蕙 采访人员 刘传书
细胞是生命的基本单位 , 了解它的过去、现在和未来不仅有助于我们了解正常的发育过程 , 也对理解疾病的产生和发展至关重要 。 然而 , 想要看清细胞的“前世今生”仍然面临很大的技术困难 。
8月17日 , 中国科学院深圳先进技术研究院合成生物学研究所研究员陈万泽以共同第一作者身份在国际顶级期刊《自然》杂志上发表长文 , 介绍了他们研究团队在国际首创的活细胞转录组测序技术(Live-seq) , 该技术首次让单细胞进行转录测序后 , 依然能保持细胞存活 , 首次实现了活细胞全基因表达的连续观测 。
“该研究实现了使用活细胞转录组测序技术对同一个活细胞多次分离部分细胞质进行多次转录组测序 , 表明这一技术有望在将来用于构建单个活细胞的转录组系列变化动态模型 。 该研究为单细胞转录组测序提供了全新的研究策略 , 为我们理解生命过程的动态变化提供了强有力的手段 , 是这一领域的又一重大突破 。 ” 北京大学生命科学学院教授汤富酬评论道 。
不杀死细胞就能进行测序
为什么人类体内的细胞拥有的基因组几乎一样 , 但是每个人却各不相同呢?基因组中数万个基因表达与否和表达程度高低 , 很大程度上决定了细胞的种类和功能 。
因此 , 如果知道细胞不同时间的基因表达的变化 , 就能够了解细胞的过去、现在和未来 。
当前 , 单细胞转录组测序技术是了解细胞状态的重要手段 , 通过单细胞转录组测序能够看清细胞现在所有基因的表达状态 。 但是该技术在理解细胞的动态变化方面却面临很大挑战 。
“利用单细胞转录组测序技术来观测细胞状态的前提 , 是需要将细胞裂解 , 提取其中的RNA来测定每个基因表达量的高低 , 但这样就不可避免地杀死了细胞 。 ”陈万泽说道 , “使用单细胞转录组测序技术 , 也只能了解到一个细胞当下的状态 , 却不能了解它的过去 , 也无法知晓它将来的功能 。 ”
通过近7年的努力 , 陈万泽与合作者开发了活细胞转录组测序技术 , 其核心是通过对活细胞中的部分细胞质进行微创提取 , 并对极其微量的细胞质RNA进行扩增 , 实现在进行单细胞转录组测序后 , 依旧保持细胞的存活和功能 , 从而可以跟踪细胞的动态变化 。
论文通讯作者、瑞士洛桑联邦理工学院教授巴特·普朗克(Bart Deplancke)表示 , 该技术兼具全基因表达分辨率和动态解析能力 , 是目前对单细胞转录组直接动态测量、偶联细胞现有状态和其后续表型的唯一解决方案 。
历经两次碰壁终于“吸”出RNA
如何在不杀死细胞的前提下 , 看到细胞的动态变化?
“我们首先想到的是外泌体 , 它是细胞向外面吐出来的小泡 , 里面有蛋白质、RNA等物质 。 如果我们把单个细胞的外泌体都收集起来 , 再对其中的RNA进行测量 , 或许就可以在一定程度上反映细胞状态而又不杀死细胞 。 ”陈万泽说道 。
单个细胞中仅有10皮克的RNA , 这相当于一克的一千亿分之一的重量 , 而细胞分泌的外泌体中的RNA更是少之又少 。 研究团队设计了一种微流控技术用以完成单细胞捕获、外泌体收集等 , 但他们发现由于外泌体中的RNA数量太少 , 根本无法实现单细胞分子水平的观测 。
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