Clontech酵母双杂系统中引入了一个AbA抗性报告基因 , 和X-α-Gal共用同一个Gal4启动子 。虽然营养缺陷型筛选压力很高 , 但是直接在四缺培养基上长得会很不好甚至直接不长 。于是就引入了二缺上先用AbA筛一轮 , 并用X-α-Gal显色辅助判断 , 再转移到四缺培养基上 , 避免筛选不到的问题 。
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【酵母双杂交法的原理,ah109酵母和y187酵母菌株的区别?】ah109酵母和y187酵母菌株的区别?
AH109是酿酒酵母菌株 , 属于真核细胞 。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的 , 因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染 , 往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素 , 来抑制细菌菌的污染和生长 。
酿酒酵母适宜的生长温度是28-30度 , 一般使用30度培养 , 温度超过32度可能导致细胞的死亡 。
AH109酿酒酵母主要用于酵母双杂交系统 , 与Y187菌株一起配套使用 , 用于研究蛋白与蛋白之间的相互作用 。
AH109酿酒酵母来源于PJ69-2A菌株 , 含有ADE2和HIS3筛选标记(James et al.,1996).MEL1是一个内源性的GAL4响应基因 。lacZ报告基因被导入进入PJ69-2A , 从而构建成了AH109(A.Holtz, unpublished).菌株中的His3 , ADE2和MEL1/LacZ报告基因是分别有三个完整的医院性的GAL4型响应启动子元件 --GAL1 , GAL2和MEL1进行启动翻译的 。
在制作AH109酿酒酵母甘油菌的时候 , 请不要使用4天以上的平板挑菌保存 , 尽量使用新鲜的平板 。
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