斐林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成,但二者有如下三点不同:
(1)溶液浓度不同
斐林试剂中NaOH溶液称为斐林试剂甲,其浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液称为斐林试剂乙,其浓度为0.05g/ml;双缩脲试剂中NaOH溶液(双缩脲试剂A)的浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液(双缩脲试剂B)的浓度为0.01g/ml.
(2)使用原理不同
斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液,它在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2O沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在.用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀).
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应.双缩脲反应实质是在碱性环境下的Cu2+与双缩脲试剂发生的紫色反应.而蛋白质分子中含有很多与双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应,可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在.
(3)使用方法不同
斐林试剂使用时,先将NaOH溶液和CuSO4溶液混合(将4~5滴CuSO4溶液滴入2mlNaOH溶液中),而后立即使用:双缩脲试剂使用时,先加入NaOH溶液(2mL),振荡摇匀,造成碱性的反应环境,然后再加入3~4滴CuSO4溶液,振荡摇匀后观察现象.
【斐林试剂的使用方法,斐林试剂的主要成分?】
文章插图
斐林试剂的主要成分?
含量为0.1g/mL的氢氧化钠溶液
含量为0.05g/mL的硫酸铜溶液
它常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在 , 与单糖中的还原性糖(葡萄糖、果糖等)反应生成砖红色沉淀 。
斐林试剂是二价铜离子的酒石酸钾钠配合物 , 可以被脂肪醛或还原性糖还原为氧化亚铜 。斐林试剂为深蓝色溶液 , 在与脂肪醛或还原性糖共热时 , 蓝色消失 , 析出红色的氧化亚铜沉淀 。在氧化亚铜析出过程中 , 反应液的颜色可能经过由蓝色→绿色→黄色→红色沉淀的逐渐变化 , 反应较快时 , 直接观察到红色沉淀 。
它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下 , 能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀 。因此 , 斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否 。
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