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图5带有ZsGreen和Blasticidin（BSD）双重标记的敲减型载体 。
敲除载体
目前最常用的就是CRISPR-Cas9的基因敲除载体 ， 该系统是个二元结构 ， 需要在同一个细胞中一起表达Cas9和针对目的基因的sgRNA 。 目前所用的载体有二合一的 ， 也有分开两个载体的 。 我们优先推荐二合一型载体 。
此类型的载体也是U6启动子驱动的载体 ， 由于Cas9体积过大 ， 通常这类二合一载体仅会带有一个标记 ， 如Puromycin或GFP ， 但也有人用同时带有两个标记的载体 。 如图6所示 。

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图6基于CRISPR-Cas9的基因敲除载体 。 我们发现该载体带有ZsGreen标记 。 同时Cas9C端融合FLAG标签 。
注意
1、对于腺病毒载体 ， 由于其感染效率极高 ， 通常只需要带荧光蛋白单个标记即可 ， 但推荐编码蛋白的目的基因过表达时带常见标签融合表达；2、对于在体基因功能研究 ， 我们常用AAV载体 ， 这类载体我们往往只需要待单个荧光蛋白标记即可 ， 但推荐编码蛋白的目的基因过表达时带常见标签融合表达 。
读完上文 ， 是不是已经很清楚自己要什么样的载体了呢 ， 那就快来找汉恒构建质粒吧~返回搜狐 ， 查看更多
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